Biophysical Properties of hKv2.1/hKv1.5 Chimeric Constructs
. | . | . | . | S4-S5 linker . | . | . | . | . | . | . | . | . | . | . | . | . | . | . | S6 . | . | . | . | . | . | . | . | . | . | . | . | . | . | . | . | . | . | . | ||||||||||||||||||||||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| hKv1.5 | K | G | L | Q | I | L | G | K | T | L | Q | A | S | M | R | ll | P | V | P | V | I | V | S | N | F | N | Y | F | Y | H | R | E | T | D | H | E | E | ||||||||||||||||||||||||||||
| hKv2.1 | T | − | − | − | S | − | − | F | − | − | R | R | − | Y | N | ll | − | I | − | I | − | − | N | − | − | S | E | − | − | K | E | Q | K | R | Q | − | K | ||||||||||||||||||||||||||||
| L45Kv2.1inKv1.5 | T | − | − | − | S | − | − | F | − | − | R | R | − | Y | N | ll | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | ||||||||||||||||||||||||||||
| L45mutant1 | − | − | − | − | S | − | − | F | − | − | R | R | − | Y | N | ll | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | ||||||||||||||||||||||||||||
| L45mutant2 | − | − | − | − | − | − | − | F | − | − | R | R | − | Y | N | ll | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | ||||||||||||||||||||||||||||
| L45mutant3 | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | R | R | − | Y | N | ll | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | ||||||||||||||||||||||||||||
| L45mutant4 | − | − | − | − | − | − | − | F | − | − | R | R | − | − | − | ll | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | ||||||||||||||||||||||||||||
| L45mutant5 | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | R | R | − | − | − | ll | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | ||||||||||||||||||||||||||||
| K425F+R432N | − | − | − | − | − | − | − | F | − | − | − | − | − | − | N | ll | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | ||||||||||||||||||||||||||||
| L45S6Kv2.1inKv1.5 | T | − | − | − | S | − | − | F | − | − | R | R | − | Y | N | ll | − | I | − | I | − | − | N | − | − | S | E | − | − | K | E | Q | K | R | Q | − | K | ||||||||||||||||||||||||||||
| S6Kv2.1inKv1.5 | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | ll | − | I | − | I | − | − | N | − | − | S | E | − | − | K | E | Q | K | R | Q | − | K | ||||||||||||||||||||||||||||
| Kv1.5chimera1 | T | − | − | − | S | − | − | F | − | − | R | R | − | Y | N | ll | − | I | − | I | − | − | N | − | − | S | E | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | ||||||||||||||||||||||||||||
| Kv1.5chimera2 | T | − | − | − | S | − | − | F | − | − | R | R | − | Y | N | ll | − | − | − | − | − | − | N | − | − | S | E | − | − | K | E | Q | K | R | Q | − | K | ||||||||||||||||||||||||||||
| Kv1.5chimera3 | T | − | − | − | S | − | − | F | − | − | R | R | − | Y | N | ll | − | I | − | I | − | − | − | − | − | − | − | − | − | K | E | Q | K | R | Q | − | K | ||||||||||||||||||||||||||||
| Kv1.5chimera4 | T | − | − | − | S | − | − | F | − | − | R | R | − | Y | N | ll | − | − | − | I | − | − | − | − | − | − | − | − | − | K | E | Q | K | R | Q | − | K | ||||||||||||||||||||||||||||
| Kv1.5chimera5 | T | − | − | − | S | − | − | F | − | − | R | R | − | Y | N | ll | − | − | − | I | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | Q | K | R | Q | − | K | ||||||||||||||||||||||||||||
| Kv1.5chimera6 | T | − | − | − | S | − | − | F | − | − | R | R | − | Y | N | ll | − | − | − | I | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | Q | K | R | − | − | − | ||||||||||||||||||||||||||||
| Kv1.5chimera7 | T | − | − | − | S | − | − | F | − | − | R | R | − | Y | N | ll | − | − | − | I | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | K | R | − | − | − | ||||||||||||||||||||||||||||
| Kv1.5chimera8 | T | − | − | − | S | − | − | F | − | − | R | R | − | Y | N | ll | − | − | − | I | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | Q | K | − | − | − | − | ||||||||||||||||||||||||||||
| Kv1.5chimera9 | − | − | − | − | − | − | − | F | − | − | − | − | − | − | N | ll | − | I | − | I | − | − | N | − | − | S | E | − | − | K | E | Q | K | R | Q | − | K | ||||||||||||||||||||||||||||
| Kv1.5chimera10 | − | − | − | − | − | − | − | F | − | − | − | − | − | − | N | ll | − | − | − | I | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | Q | K | R | − | − | − | ||||||||||||||||||||||||||||
| I | V1/2 (mV) | k (mV) | τa (ms) | τd (ms) | n | V1/2,i (mV) | ki (mV) | n | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| hKv1.5 | ++ | −14.3 ± 1.0 | 5.8 ± 0.2 | 3.5 ± 0.2 | 24.9 ± 2.5 | 9 | −23.2 ± 1.3 | 3.9 ± 0.1 | 8 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| hKv2.1 | ++ | 12.3 ± 1.4 | 9.5 ± 0.6 | 33.8 ± 2.9 | 29.2 ± 2.2/170 ± 18 | 9 | −15.9 ± 1.2 | 7.2 ± 0.6 | 5 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| L45Kv2.1inKv1.5 | − | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| L45mutant1 | − | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| L45mutant2 | − | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| L45mutant3 | + | −20.6 ± 1.6 | 7.1 ± 0.2 | 10.1 ± 1.2 | 20.9 ± 3.2 | 7 | −30.6 ± 1.1 | 4.1 ± 0.1 | 6 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| L45mutant4 | + | 11.1 ± 3.8 | 9.6 ± 1.0 | 3.9 ± 0.4 | 4.5 ± 0.9 | 6 | −5.8 ± 1.6 | 5.0 ± 0.7 | 6 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| L45mutant5 | + | −8.7 ± 2.4 | 9.8 ± 0.8 | 3.9 ± 0.2 | 2.0 ± 0.3 | 9 | −16.9 ± 1.8 | 6.4 ± 0.4 | 8 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| K425F+R432N | +/− | 0.8 ± 2.9 | 7.0 ± 0.8 | 4.7 ± 0.4 | ND | 3 | ND | ND | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| L45S6Kv2.1inKv1.5 | + | −8.4 ± 1.4 | 6.2 ± 0.2 | 48.1 ± 3.3 | 170 ± 17 | 5 | −18.4 ± 1.2 | 4.1 ± 0.4 | 3 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| S6Kv2.1inKv1.5 | ++ | 1.1 ± 2.5 | 6.0 ± 0.5 | 14.9 ± 2.0 | 395 ± 35 | 8 | −8.7 ± 2.4 | 4.9 ± 0.3 | 5 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Kv1.5chimera1 | − | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Kv1.5chimera2 | − | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Kv1.5chimera3 | + | −13.9 ± 1.1 | 7.4 ± 0.4 | 39.9 ± 4.2 | 234 ± 40 | 7 | −27.5 ± 0.6 | 5.4 ± 0.1 | 4 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Kv1.5chimera4 | + | −23.7 ± 2.3 | 6.0 ± 0.4 | 13.0 ± 1.4 | 513 ± 41 | 5 | −37.1 ± 3.0 | 4.2 ± 0.6 | 4 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Kv1.5chimera5 | + | −31.3 ± 1.5 | 5.7 ± 0.6 | 10.6 ± 1.0 | 356 ± 52 | 6 | −44.9 ± 1.3 | 4.8 ± 0.4 | 5 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Kv1.5chimera6 | + | −16.4 ± 1.4 | 7.3 ± 0.3 | 10.0 ± 0.9 | 306 ± 13 | 6 | −31.2 ± 2.0 | 4.5 ± 0.4 | 5 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Kv1.5chimera7 | − | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Kv1.5chimera8 | − | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Kv1.5chimera9 | ++ | 0.1 ± 1.3 | 6.0 ± 0.4 | 8.3 ± 0.9 | 366 ± 48 | 6 | −11.8 ± 1.2 | 5.4 ± 0.4 | 5 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Kv1.5chimera10 | ++ | −12.4 ± 0.6 | 6.5 ± 0.3 | 4.6 ± 0.4 | 211 ± 18 | 9 | −27.0 ± 0.6 | 4.0 ± 0.2 | 9 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
. | . | . | . | S4-S5 linker . | . | . | . | . | . | . | . | . | . | . | . | . | . | . | S6 . | . | . | . | . | . | . | . | . | . | . | . | . | . | . | . | . | . | . | ||||||||||||||||||||||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| hKv1.5 | K | G | L | Q | I | L | G | K | T | L | Q | A | S | M | R | ll | P | V | P | V | I | V | S | N | F | N | Y | F | Y | H | R | E | T | D | H | E | E | ||||||||||||||||||||||||||||
| hKv2.1 | T | − | − | − | S | − | − | F | − | − | R | R | − | Y | N | ll | − | I | − | I | − | − | N | − | − | S | E | − | − | K | E | Q | K | R | Q | − | K | ||||||||||||||||||||||||||||
| L45Kv2.1inKv1.5 | T | − | − | − | S | − | − | F | − | − | R | R | − | Y | N | ll | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | ||||||||||||||||||||||||||||
| L45mutant1 | − | − | − | − | S | − | − | F | − | − | R | R | − | Y | N | ll | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | ||||||||||||||||||||||||||||
| L45mutant2 | − | − | − | − | − | − | − | F | − | − | R | R | − | Y | N | ll | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | ||||||||||||||||||||||||||||
| L45mutant3 | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | R | R | − | Y | N | ll | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | ||||||||||||||||||||||||||||
| L45mutant4 | − | − | − | − | − | − | − | F | − | − | R | R | − | − | − | ll | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | ||||||||||||||||||||||||||||
| L45mutant5 | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | R | R | − | − | − | ll | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | ||||||||||||||||||||||||||||
| K425F+R432N | − | − | − | − | − | − | − | F | − | − | − | − | − | − | N | ll | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | ||||||||||||||||||||||||||||
| L45S6Kv2.1inKv1.5 | T | − | − | − | S | − | − | F | − | − | R | R | − | Y | N | ll | − | I | − | I | − | − | N | − | − | S | E | − | − | K | E | Q | K | R | Q | − | K | ||||||||||||||||||||||||||||
| S6Kv2.1inKv1.5 | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | ll | − | I | − | I | − | − | N | − | − | S | E | − | − | K | E | Q | K | R | Q | − | K | ||||||||||||||||||||||||||||
| Kv1.5chimera1 | T | − | − | − | S | − | − | F | − | − | R | R | − | Y | N | ll | − | I | − | I | − | − | N | − | − | S | E | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | ||||||||||||||||||||||||||||
| Kv1.5chimera2 | T | − | − | − | S | − | − | F | − | − | R | R | − | Y | N | ll | − | − | − | − | − | − | N | − | − | S | E | − | − | K | E | Q | K | R | Q | − | K | ||||||||||||||||||||||||||||
| Kv1.5chimera3 | T | − | − | − | S | − | − | F | − | − | R | R | − | Y | N | ll | − | I | − | I | − | − | − | − | − | − | − | − | − | K | E | Q | K | R | Q | − | K | ||||||||||||||||||||||||||||
| Kv1.5chimera4 | T | − | − | − | S | − | − | F | − | − | R | R | − | Y | N | ll | − | − | − | I | − | − | − | − | − | − | − | − | − | K | E | Q | K | R | Q | − | K | ||||||||||||||||||||||||||||
| Kv1.5chimera5 | T | − | − | − | S | − | − | F | − | − | R | R | − | Y | N | ll | − | − | − | I | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | Q | K | R | Q | − | K | ||||||||||||||||||||||||||||
| Kv1.5chimera6 | T | − | − | − | S | − | − | F | − | − | R | R | − | Y | N | ll | − | − | − | I | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | Q | K | R | − | − | − | ||||||||||||||||||||||||||||
| Kv1.5chimera7 | T | − | − | − | S | − | − | F | − | − | R | R | − | Y | N | ll | − | − | − | I | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | K | R | − | − | − | ||||||||||||||||||||||||||||
| Kv1.5chimera8 | T | − | − | − | S | − | − | F | − | − | R | R | − | Y | N | ll | − | − | − | I | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | Q | K | − | − | − | − | ||||||||||||||||||||||||||||
| Kv1.5chimera9 | − | − | − | − | − | − | − | F | − | − | − | − | − | − | N | ll | − | I | − | I | − | − | N | − | − | S | E | − | − | K | E | Q | K | R | Q | − | K | ||||||||||||||||||||||||||||
| Kv1.5chimera10 | − | − | − | − | − | − | − | F | − | − | − | − | − | − | N | ll | − | − | − | I | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | − | Q | K | R | − | − | − | ||||||||||||||||||||||||||||
| I | V1/2 (mV) | k (mV) | τa (ms) | τd (ms) | n | V1/2,i (mV) | ki (mV) | n | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| hKv1.5 | ++ | −14.3 ± 1.0 | 5.8 ± 0.2 | 3.5 ± 0.2 | 24.9 ± 2.5 | 9 | −23.2 ± 1.3 | 3.9 ± 0.1 | 8 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| hKv2.1 | ++ | 12.3 ± 1.4 | 9.5 ± 0.6 | 33.8 ± 2.9 | 29.2 ± 2.2/170 ± 18 | 9 | −15.9 ± 1.2 | 7.2 ± 0.6 | 5 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| L45Kv2.1inKv1.5 | − | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| L45mutant1 | − | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| L45mutant2 | − | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| L45mutant3 | + | −20.6 ± 1.6 | 7.1 ± 0.2 | 10.1 ± 1.2 | 20.9 ± 3.2 | 7 | −30.6 ± 1.1 | 4.1 ± 0.1 | 6 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| L45mutant4 | + | 11.1 ± 3.8 | 9.6 ± 1.0 | 3.9 ± 0.4 | 4.5 ± 0.9 | 6 | −5.8 ± 1.6 | 5.0 ± 0.7 | 6 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| L45mutant5 | + | −8.7 ± 2.4 | 9.8 ± 0.8 | 3.9 ± 0.2 | 2.0 ± 0.3 | 9 | −16.9 ± 1.8 | 6.4 ± 0.4 | 8 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| K425F+R432N | +/− | 0.8 ± 2.9 | 7.0 ± 0.8 | 4.7 ± 0.4 | ND | 3 | ND | ND | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| L45S6Kv2.1inKv1.5 | + | −8.4 ± 1.4 | 6.2 ± 0.2 | 48.1 ± 3.3 | 170 ± 17 | 5 | −18.4 ± 1.2 | 4.1 ± 0.4 | 3 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| S6Kv2.1inKv1.5 | ++ | 1.1 ± 2.5 | 6.0 ± 0.5 | 14.9 ± 2.0 | 395 ± 35 | 8 | −8.7 ± 2.4 | 4.9 ± 0.3 | 5 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Kv1.5chimera1 | − | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Kv1.5chimera2 | − | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Kv1.5chimera3 | + | −13.9 ± 1.1 | 7.4 ± 0.4 | 39.9 ± 4.2 | 234 ± 40 | 7 | −27.5 ± 0.6 | 5.4 ± 0.1 | 4 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Kv1.5chimera4 | + | −23.7 ± 2.3 | 6.0 ± 0.4 | 13.0 ± 1.4 | 513 ± 41 | 5 | −37.1 ± 3.0 | 4.2 ± 0.6 | 4 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Kv1.5chimera5 | + | −31.3 ± 1.5 | 5.7 ± 0.6 | 10.6 ± 1.0 | 356 ± 52 | 6 | −44.9 ± 1.3 | 4.8 ± 0.4 | 5 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Kv1.5chimera6 | + | −16.4 ± 1.4 | 7.3 ± 0.3 | 10.0 ± 0.9 | 306 ± 13 | 6 | −31.2 ± 2.0 | 4.5 ± 0.4 | 5 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Kv1.5chimera7 | − | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Kv1.5chimera8 | − | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Kv1.5chimera9 | ++ | 0.1 ± 1.3 | 6.0 ± 0.4 | 8.3 ± 0.9 | 366 ± 48 | 6 | −11.8 ± 1.2 | 5.4 ± 0.4 | 5 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Kv1.5chimera10 | ++ | −12.4 ± 0.6 | 6.5 ± 0.3 | 4.6 ± 0.4 | 211 ± 18 | 9 | −27.0 ± 0.6 | 4.0 ± 0.2 | 9 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
The L45 and S6T sequence of hKv1.5 is shown on top, above the hKv2.1 sequence. Mutant constructs were created in an hKv1.5 background with the respective substitutions set in bold. A + or − in column I indicates the presence or absence of time-dependent ionic current in the voltage range of −130 to +130 mV. The amount of plus signs represents the amplitude of K+ current recorded. For the double mutant K425F+R432N, +/− indicates that only very small time-dependent currents were observed with a maximal current amplitude of ∼50 pA with 7 μg cDNA transfected. V1/2, k, and time constants τa at V1/2 +60 mV and τd at V1/2 −40 mV were obtained as in Table I. ND, not determined.