Skip to Main Content
TABLE III

Kinetic and Coupling Analyses for αY127 and αD97, δI43, and εN39 Mutants

Normalized Keq (mut/wt)
Construct
Agonist
k0 (s−1)
kcobs (s−1)
kccor (s−1)
Keq (ko/kccor)
Observed
Predicted
ΔΔG
n
wt Cho 120 – 2583 0.046 1.0 – –  
wt ACh 48000 – 1700 28.2 1.0 – –  
D97H Cho 1364 (19) 480 1282 (80) 1.06 (0.05) 23 – – 
D97Y Cho 1420 (29) 563 1503 (48) 0.95 (0.03) 20.5 – – 
D97M Cho 462 680 1816 0.25 5.5 – – 
Y127H Cho 520 (68) 577 (86) 1541 (295) 0.33 (0.01) 7.3 – – 
Y127C ACh 862 (119) 4674 (248) 5843 (310) 0.14 (0.03) 0.005 – – 
Y127H+D97H Cho 5066 (166) 649 (66) 1734 (176) 2.98 (0.3) 65 167.9 0.55 
Y127H+D97Y Cho 6033 (540) 904 (19) 2414 (52) 2.5 (0.3) 54 150 0.61 
Y127H+D97M Cho 3338 (228) 1437 (234) 3837 (624) 0.93 (0.19) 18.9 40.2 0.44 
Y127C+D97H ACh 13400 (1249) 2694 (181) 3368 (226) 4.00 (0.64) 0.14 0.04 −0.80 
Y127C+D97Y ACh 16230 (204) 4601 (111) 5751 (139) 2.82 (0.03) 0.1 0.1 0.01 
Y127C+D97M ACh 6085 (924) 3503 (176) 4379 (220) 1.39 (0.18) 0.05 0.03 −0.34 
δI43N ACh 5395 1472 1840 2.93 0.1 – – 
δI43H ACh 3820 (227) 1546 (159) 1932 (198) 2.04 (0.31) 0.07 – – 
δI43T ACh 4778 (278) 2768 (160) 3460 (200) 1.4 (0.16) 0.05 – – 
δI43A ACh 2424 (266) 1948 (458) 2434 (572) 1.1 (0.36) 0.04 – – 
αY127H+δI43H Cho 530 (33) 1980 (38) 5285 (100) 0.1 (0.004) 2.16 0.5 0.84 
εN39F ACh 27776 2210 2763 10.1 0.4 – – 
εN39D Cho 40 (2) 882 (87) 2354 (231) 0.017 (0.001) 0.4 – – 
εN39H Cho ND ND ND ND ND ND ND – 
εN39I ACh ND ND ND ND ND ND ND – 
Normalized Keq (mut/wt)
Construct
Agonist
k0 (s−1)
kcobs (s−1)
kccor (s−1)
Keq (ko/kccor)
Observed
Predicted
ΔΔG
n
wt Cho 120 – 2583 0.046 1.0 – –  
wt ACh 48000 – 1700 28.2 1.0 – –  
D97H Cho 1364 (19) 480 1282 (80) 1.06 (0.05) 23 – – 
D97Y Cho 1420 (29) 563 1503 (48) 0.95 (0.03) 20.5 – – 
D97M Cho 462 680 1816 0.25 5.5 – – 
Y127H Cho 520 (68) 577 (86) 1541 (295) 0.33 (0.01) 7.3 – – 
Y127C ACh 862 (119) 4674 (248) 5843 (310) 0.14 (0.03) 0.005 – – 
Y127H+D97H Cho 5066 (166) 649 (66) 1734 (176) 2.98 (0.3) 65 167.9 0.55 
Y127H+D97Y Cho 6033 (540) 904 (19) 2414 (52) 2.5 (0.3) 54 150 0.61 
Y127H+D97M Cho 3338 (228) 1437 (234) 3837 (624) 0.93 (0.19) 18.9 40.2 0.44 
Y127C+D97H ACh 13400 (1249) 2694 (181) 3368 (226) 4.00 (0.64) 0.14 0.04 −0.80 
Y127C+D97Y ACh 16230 (204) 4601 (111) 5751 (139) 2.82 (0.03) 0.1 0.1 0.01 
Y127C+D97M ACh 6085 (924) 3503 (176) 4379 (220) 1.39 (0.18) 0.05 0.03 −0.34 
δI43N ACh 5395 1472 1840 2.93 0.1 – – 
δI43H ACh 3820 (227) 1546 (159) 1932 (198) 2.04 (0.31) 0.07 – – 
δI43T ACh 4778 (278) 2768 (160) 3460 (200) 1.4 (0.16) 0.05 – – 
δI43A ACh 2424 (266) 1948 (458) 2434 (572) 1.1 (0.36) 0.04 – – 
αY127H+δI43H Cho 530 (33) 1980 (38) 5285 (100) 0.1 (0.004) 2.16 0.5 0.84 
εN39F ACh 27776 2210 2763 10.1 0.4 – – 
εN39D Cho 40 (2) 882 (87) 2354 (231) 0.017 (0.001) 0.4 – – 
εN39H Cho ND ND ND ND ND ND ND – 
εN39I ACh ND ND ND ND ND ND ND – 

Mutations of αD97 (M, H, and Y) on Y127H or Y127C constructs generally showed a fold-change in Keq approximately half that predicted from the product of the single-mutant fold-change. The coupling energies for both double mutant series are small, suggesting that the coupling energy is distributed across multiple sites along between the first and second Φ blocks.

Close Modal

or Create an Account

Close Modal
Close Modal